domingo, 2 de enero de 2011

Observación Microscópica


TÉCNICAS DE OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA EN FRESCO

Entre los objetos necesarios para obtener una preparación microscópica sobre la que realizar la observación, se encuentran:
- porta-objeto, que es un rectángulo de vidrio de 20 x 60 mm y 1,5 mm de espesor
- cubre-objeto, de forma cuadrada y mucho más fino, normalmente 15x15 mm
- aguja y asa de platino (hoy de una aleación de níquel-cromo), que son un hilo rígido de 0,5 mm de diámetro y 5-6 cm de longitud colocados en el extremo de un mango metálico o varilla de madera.

La observación microscópica en fresco de un cultivo en medio sólido se hace tomando una porción de la pátina, con aguja, colocándolo sobre una gota de agua estéril, depositada previamente sobre el portaobjeto y poniendo encima, con precaución, un cubre-objeto. El examen microscópico en fresco de un líquido que contiene microbios se hace simplemente colocando una gota del mismo, tomada con el asa (previamente flameada a la llama de un mechero), en un porta-objeto y poniendo encima, con precaución, un cubre-objeto.

Se emplea microscopio óptico, preferiblemente con técnica de contraste de fase, a 600 x, observando los siguientes caracteres morfológicos:
- Características de la reproducción vegetativa: Gemación. Bipartición. Combinación de los dos procesos.
- Características de las células vegetativas: Morfología celular en medio sólido. Morfología celular en medio líquido. Tamaño de las células.
- Características de las agrupaciones celulares: Pareja gemante. Grupo multigemante. Pseudomicelio.
- Características de la reproducción sexual: Formación de zigoto. Formación de ascosporas. Forma, tamaño y número de las esporas.

ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL

Los microorganismos son ubicuos, están en todas partes, de ahí que el material usado y los componentes de los medios de cultivo e incluso cualquier producto que vaya a ser utilizado en un proceso industrial, estarán contaminados por una variedad de microorganismos por lo que se impone su eliminación si se quiere trabajar con cultivos puros, cada uno de ellos constituidos por muchas células pero todas descendientes de una sola primitiva; además, para poder conocer y estudiar las cualidades de los distintos microbios hay que separarlos entre si y multiplicarlos, esto requiere disponer de espacios ambientes estériles en donde, no habiendo microbios solo existirán los que nosotros pongamos y sus descendientes.

Esterilizar es destruir todo vestigio de vida. Los ambientes estériles pueden prepararse en todo tipo de recipientes.

Antes de proceder a la esterilización es preciso acondicionar el material que se va a esterilizar; para ello el material de vidrio se lava con mezcla crómica o con detergente y se
aclara bien con agua una vez seco se tapa con algodón graso y se envuelve en papel.

Para la esterilización se emplean métodos físicos y métodos químicos.

TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN

- Flameado. Consiste en someter directamente a la llama del mechero el material a esterilizar.

- Calor seco. Actúa carbonizando la materia orgánica.
El material a esterilizar, envuelto o no según los casos se introduce en la estufa, se cierra la puerta y se pone en marcha. La esterilización se consigue manteniendo la temperatura a 140° durante 2 horas, o 160° durante 90 minutos. A mayor temperatura se necesita menos tiempo. La estufa no debe abrirse hasta que no se ha conseguido la temperatura ambiente para evitar roturas del material por un cambio brusco de temperatura.

- Calor húmedo. Actúa coagulando las proteínas del microorganismo.
Existen varias posibilidades: Ebullición. Vapor fluente. Vapor a presión.
Vapor saturado a presión. La coagulación del protoplasma celular y de las esporas se acentúa cuando se trabaja con vapor saturado y a presión, ya que el calor a presión hidrata y coagula rápidamente. Esta técnica requiere el uso del autoclave que es un aparato que permite elevar la presión y la temperatura. finalmente retirar el material.

- Filtración. Tiene por objeto retener las partículas sólidas que pueda contener un líquido.

- Radiaciones. Algunas radiaciones electromagnéticas se utilizan con fines de esterilización. Luz ultravioleta.

- Ozono. Su acción es debida al poder oxidante que ejerce sobre los sistemas enzimáticos de los microbios.

- Soluciones desinfectantes. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden producir alteraciones. Desinfección no es sinónimo de esterilización. Fenoles líquidos, Hipocloritos, Aldehidos, Alcohol, Compuestos de amonio cuaternario

- Oxido de etileno.

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